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NEWS尊龙凯时组织固定病理染色实验注意事项
来源:张磊莉 日期:2025-03-24病理学技术为病理诊断奠定了基础,这一技术的发展直接影响着病理诊断学的进步。最初的诊断主要是从形态学、组织学或生物化学的角度进行分析。病理学是研究疾病发生和发展的科学,主要关注在疾病演变过程中,组织和细胞的代谢、功能及结构的变化。
在染色实验中,前期的组织处理对最终染色效果至关重要。组织处理涉及多个关键环节,包括取材、固定、脱水、透明、浸润、包埋、切片和染色等步骤。以下是关于组织取材和固定的一些注意事项:
1. 取材时应选择新鲜、适中大小的组织块,避免挤压变形,尽量保持组织的原有形态和清洁。理想的组织块尺寸不应超过2×15×0.3cm。
2. 固定是关键步骤,通常使用10%甲醛溶液或其他固定液(如Carnoy固定液等),固定时间需根据组织块大小而定(一般不宜超过24小时),以防止组织自溶或腐败。
3. 固定液的选择将直接影响后续染色效果,例如,Bouin's固定液能够更好地保留组织的染色特性。
1. 破坏细胞内的溶酶体酶:组织离体后,失去氧气供应,细胞将释放溶酶体酶导致细胞自溶,因此固定的首要目的就是迅速杀死细胞并固定细胞结构。
2. 杀灭外来细菌:组织脱离活体后,如果不及时固定,将成为细菌的良好培养基,极易导致腐坏。
3. 尽量保持细胞活体时的原状:活细胞的微细结构、核的形态以及细胞内成分都需通过固定来保留。
4. 凝固和沉淀细胞内的产物:细胞由多种成分构成,固定过程应尽可能保持这些成分的不溶性,以利于后续染色。
5. 保持组织的硬度和弹性:确保在随后的脱水、透明和浸蜡过程中不发生显著的变形。
6. 便于区分不同细胞的折光率:固定能使不同细胞或细胞内成分产生不同的折光率,便于染色后识别细胞结构。
7. 对组织的分析性染色起媒染作用:如用Bouin's固定液固定的组织可使结缔组织呈现更加鲜艳的染色效果。
8. 保存细胞内的抗原性:细胞内抗原性得以保持,有利于免疫组化染色中的抗原抗体结合反应。
1. 固定的及时性:组织应在离体后1小时内立即固定。
2. 固定液的选择:应根据具体需求选择恰当的固定液。
3. 固定液用量:应大于组织体积的4-10倍。
4. 固定液浓度:浓度需准确,过稀或过浓都会影响形态和固定效果。
5. 固定温度:应在室温或35-37℃的全封闭组织处理机中进行,过高温度会加速自溶和细胞损伤。
6. 固定时间:新鲜标本应剖开固定12-24小时后再处理,大标本可在室温下再固定4-6小时。
7. 对于需要进行分子病理分析的标本,应在标本离体至脱水的总时间一般不超过24小时(厚度2mm),且不少于6小时。
尊龙凯时的Bouin's固定液(产品编号:BL-G016)具有优良的固定性能,主要成分为PA、甲醛和乙酸。该固定液适用于细胞和组织的固定,广泛应用于免疫组化、病理学研究及胚胎学研究等领域。此外,在研究鸡法氏囊的显微结构时,亦可利用它进行光学观察,帮助节省人力和物力。
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