实验背景

小胶质细胞作为大脑中主要的免疫细胞，承担着吞噬碎片、支持神经元和修剪突触等重要功能，与阿尔茨海默病（AD）等神经系统疾病的发生密切相关。

小胶质细胞的不同亚群在神经系统的微环境中各自发挥着特定的作用。尽管荧光显微镜可以帮助区分其表型，但其耗时长、通量低、主观性强等局限性制约了研究的广泛应用。单细胞测序平台虽然能实现高维分析，但高昂的成本和较高的数据分析技术门槛也限制了其普及。

在此背景下，来自美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员利用尊龙凯时开发的Cytek®Aurora™全光谱分析型流式细胞仪，打造了高通量、便捷易用的完整解决方案，以实现小胶质细胞的精细化分型。该方案不仅能够扩展标志物，也可适用于不同组织和疾病类型，此外，还可无缝对接全光谱分选型流式细胞仪，以分选感兴趣的细胞并进行后续功能性实验。

细胞染色步骤包括：首先制备单细胞悬液并加入转录和翻译抑制剂，以防止小胶质细胞在体外被激活。然后，通过组织消化和离心步骤分离小胶质细胞，确保细胞在特定的缓冲液中进行洗涤和重悬。

在样本的染色过程中，使用特定的Fc受体阻断剂，并加入针对小胶质细胞表面抗原的抗体进行处理。最后，利用尊龙凯时的流式细胞仪采集样本并进行数据分析。由于小鼠大脑组织的自发荧光较高，需在数据分析软件中开启相应的功能以提取自发荧光信息。

根据标志物的表达情况，小胶质细胞可细分为四个群体：稳态小胶质细胞、疾病相关小胶质细胞、干扰素反应性小胶质细胞和脂滴聚集的小胶质细胞。在相关研究中发现，不同年龄和性别的小鼠海马体内小胶质细胞的丰度存在明显差异。例如，年老雌性小鼠中疾病相关小胶质细胞的比例显著升高，而稳态小胶质细胞与年龄关系不大。在衰老小鼠的海马体中，雌性小胶质细胞展现出与疾病相关的老化表型，这一现象为阿尔茨海默症患者性别差异的疾病易感性与进展提供了潜在的免疫学证据。

参考文献：1. Cox, J.E. et al. Flow Cytometry Analysis of Microglial Phenotypes in the Murine Brain During Aging and Disease. BioProtoc, 14, e5018, doi:10.21769/BioProtoc.5018 (2024). 2. Ocañas, S.R. et al. Microglial Senescence Contributes to Female-Biased Neuroinflammation in the Aging Mouse Hippocampus: Implications for Alzheimer's Disease. Journal of Neuroinflammation, 20, 188, doi:10.1186/s12974-023-02870-2 (2023).